Анализ на гепатит С: ПЦР-диагностика

ПЦР на гепатит С – многократное избирательное копирование заданного участка ДНК (нуклеиновой кислоты) предполагаемого агрессора с помощью синтетических праймеров. Маркером выступал олигонуклеотид – часть цепи нуклеиновой кислоты, синтез которой он запускает в определенных лабораторных условиях. Биохимик Кэри Муллис получил

Нобелевскую премию по химии за открытие, изменившее молекулярную биологию и медицину и позволившее диагностировать болезни на ранних стадиях. Позже были разработаны смеси, увеличивающие скорость проведения реакции и одновременно позволяющие достичь высокой точности в копировании.

Коротко о проблемах диагностики

Возможность использования анализа ПЦР на гепатит С – настоящий прорыв, совершенный медициной в конце прошлого века. Опасное заболевание печени, с его стремительным развитием, известно своим коварством и трудностью обнаружения на ранних стадиях. Каждый пятый потенциальный вирусоноситель может стать источником заражения, даже не подозревая об этом. В стремительном течении болезни может развиваться необратимый цирроз печени, неминуемо приводящий к летальному исходу. До появления возможности использования метода ПЦР, гепатит С тоже можно было диагностировать, но для получения достоверного результата требовалось несколько исследований, и результат каждого не давал окончательного ответа гепатологу. Использовались:

• Серологический метод, выявляющий наличие антител к опасному заболеванию. Метод обнаруживал присутствие в организме выработанных антител. Однако науке известно, что в 20% случаев происходит самоизлечение, при котором болезнь проходит самопроизвольно, и печень продолжает функционировать. Первичность серологического анализа не позволяет достоверно установить присутствие вируса в организме. Есть факт появления антител в крови, и для их выработки должно пройти определенное время. Возможно, иммунитет уже справился с вирусом, благодаря здоровому состоянию, а антитела все еще циркулируют в кровеносном русле.
• Применение теста на иммуноглобулины позволяет установить присутствие вирусной инфекции, но только через месяц после ее попадания в организм, когда начинается выработка антител.

• Биопсия печени – наиболее достоверный способ выяснить сразу несколько обстоятельств – активность вируса, состояние гепатоцитов, степень поражения. Проведение процедуры биопсии проходит под местной анестезией и дает возможность назначить корректное лечение. Но извлечение микрочастицы при современном уровне диагностики производится нечасто, потому что есть другие, менее инвазивные методы.
• Экспресс-тест на наличие гепатита С не может являться единственным диагностическим методом при развитии воспаления в гепатоцитах, хоть и обладает большой достоверностью.
• Проведение УЗИ только дает информацию о произошедших в печени изменениях (увеличенные размеры, деформация краев или наличие видоизмененных участков). Ультразвуковое исследование служит вспомогательным методом, позволяющим определить деформации, но не причину их возникновения.
• Эластометрия, проводимая с помощью специального аппарата (фиброскана), дает возможность обнаружить произошедшие в клетках трансформации, прогрессирующие под действием вируса. Однако назначение аппаратного исследование происходит только после достоверного обнаружения патогенного агента в организме.

ПЦР на гепатит С – метод диагностики на уровне молекул. Его считают наиболее эффективным и информативным в обнаружении многих заболеваний, в том числе, и гепатита С. Применение анализа ПЦР гепатит Сне только обнаруживает, но и характеризует – определяет степень агрессивности. После проведения этого качественного и прямого исследования, появляется смысл в использовании количественных или опосредованных методов.

Суть и задачи полимеразной цепной реакции

ПЦР – высокоточный и эффективный метод исследования, разработанный в молекулярной биологии и взятый на вооружение медициной после проведения некоторых усовершенствований. Диагностика – не единственный аспект использования в практических целях реакции, при проведении которой увеличивается количество заданных фрагментов ДНК в биологической пробе. Амплификация ДНК – только небольшая часть огромных возможностей, появившихся у человечества после революционного открытия Хьелля Клеппе и Кэри Муллиса.

С помощью ПЦ-реакции ученые могут вводить мутации и сращивать фрагменты ДНК, достоверно определять отцовство и выделять новые гены, проводить клонирование геном и еще много других процессов, дающих постепенные плоды в качественном и количественном изменении жизни человечества. В случае с воспалением инфекционного характера, развивающимся в клетках печени под действием патогенного агента, возможно диагностировать с помощью ПЦР гепатит С. Однако это далеко не единственная информация, которую получает гепатолог. Такое исследование обеспечивает:

• определение наличия вируса в крови пациента, благодаря чему начать лечение можно уже на самых ранних стадиях развития болезни;
• выявление самоизлечения, что исключает патологию, при других исследованиях диагностируемую на основании присутствия в крови антител;
• диагностику при наличии ощутимых признаков (повышении билирубина, фосфатазы и печеночных ферментов в биохимическом анализе крови), пока нет выработанных иммуннозащитных механизмов, появляющихся позже;
• возможность контролировать процесс лечения и передачу внутриутробно этого и других вирусов гепатита.

За внешней простотой описания процесса кроется огромная работа ученых разных стран, занимавшихся в разное время его разработкой и усовершенствованием. Выбранный для копирования участок, под действием полимераз и добавок ДНК, присоединяет комплементарные праймеры, и образовавшуюся цепочку затем синтезирует ДНК-полимераза. Праймеры способны обнаружить даже одинокие фрагменты вируса по заданной программе (каждый из них соответствует одной из цепей и определяет границы воспроизводимого участка).

Все эти процессы происходят в амплификаторе – специальном приборе, существующем сегодня в различных модификациях. Есть такие, где задаются сложные программы или могут встраиваться в автоматизированные системы. На вооружении медиков есть способы, способные выполнять горячий старт, хранить амплифицированные молекулы, оснащенные флуоресцентными детекторами для работы в реальном времени.

Виды анализа в исследовании вирусного гепатита

В современной гепатологии используется несколько видов диагностики, задействованных при обнаружении и исследовании гепатита С. Может проводиться качественная и количественная реакция. Первая – на начальном этапе, чтобы обнаружить реальное присутствие патогенного агента, атакующего гепатоциты. Вторая необходима для определения его концентрации. Она задействуется неоднократно – сначала для назначения лечебного курса, а затем для определения успешности проводимой противовирусной терапии.

Способность вируса мутировать приводит к постоянному появлению вариантов. Из семи обнаруженных, в России активно действуют типы №1, 2 и 3. У них разная устойчивость и это определяет не только эффективность проводимого лечения, но и его продолжительность. Диагностика с помощью ПЦР дает возможность различать между собой генотипы и назначать корректную терапию.

Показанием к применению диагностического метода не обязательно может быть подозрение на наличие вируса. Его используют при визуальных или лабораторных признаках негативных трансформаций в функциях и состоянии печени, для контроля за лечением, исключения смешанных типов поражения и контроля за возможным возникновением рецидивов.

Анализ ПЦР – наглядная демонстрация применения достижений молекулярной биологии. Когда открытие абстрактных и бесполезных с виду процессов в практической медицине после проведенной доработки стало одним из самых информативных диагностических методов.